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【環(huán)凱原創(chuàng)】有趣的細(xì)菌拉絲試驗(yàn) — 快速區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌

發(fā)布時(shí)間： 2023-06-30　　點(diǎn)擊次數(shù)： 4786次

是否有想知道平板上的分離菌的到底是革蘭氏陰性還是陽(yáng)性菌，卻因沒(méi)有革蘭氏染色或沒(méi)有顯微鏡或不會(huì)革蘭氏染色操作而不知所措？或者，革蘭氏染色后還不確定標(biāo)本測(cè)試菌是革蘭氏陰性還是陽(yáng)性菌的？
下面給大家介紹個(gè)簡(jiǎn)單又有趣的解決方法 —— 細(xì)菌拉絲試驗(yàn)，不需染色劑不需顯微鏡，一分鐘輕松區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌。
此法在1970年Smith^【1】首先報(bào)道應(yīng)用去氧膽酸鈉溶液做拉絲試驗(yàn)區(qū)分弧菌與非弧菌（如氣單胞菌屬細(xì)菌），初步鑒別霍亂弧菌；1981年Shushan等^【2】和1983年Agbonlahor等^【3】相繼應(yīng)用氫氧化鉀溶液做拉絲試驗(yàn)區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌。
目前國(guó)內(nèi)細(xì)菌拉絲試驗(yàn)主要也是應(yīng)用于兩個(gè)方面：一是用于霍亂弧菌初步鑒別^【4】，二是用于區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌^【5-8】。
區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌的拉絲試驗(yàn)方法^【6】：取一張洗凈玻片，滴加25g/L氫氧化鉀水溶液一滴，根據(jù)菌落大小，從平板上挑取單個(gè)菌落或數(shù)個(gè)純培養(yǎng)菌落，置于氫氧化鉀滴液中研磨，經(jīng)15-60秒，自混懸液中輕輕提起接種環(huán)，仔細(xì)觀察；60秒內(nèi)混懸物中形成黏液狀并可拉成細(xì)絲（5mm以上）為陽(yáng)性（對(duì)應(yīng)是革蘭氏陰性菌），60秒混懸物均勻不出現(xiàn)細(xì)絲者為陰性（對(duì)應(yīng)是革蘭氏陽(yáng)性菌）。

為什么會(huì)是這樣的結(jié)果？
目前有兩種說(shuō)法，第一種說(shuō)法是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁在稀堿氫氧化鉀溶液中容易裂解，裂解后釋放出DNA，使氫氧化鉀溶液變?yōu)檎吵聿⑿纬烧辰z，反之，稀氫氧化鉀對(duì)此革蘭氏陽(yáng)性菌無(wú)此作用^【5】；第二種說(shuō)法是與細(xì)胞壁化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)，在氫氧化鉀作用下革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁中所含的脂多糖、脂蛋白及脂質(zhì)被皂化而形成粘稠物，致拉絲試驗(yàn)陽(yáng)性，而革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁主要成分是粘肽，氫氧化鉀不能使其形成粘稠物，故拉絲試驗(yàn)陰性。革蘭氏陰性經(jīng)過(guò)氫氧化鉀溶液處理后再革蘭氏染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)菌體細(xì)胞壁溶解，呈模糊絮片狀，細(xì)胞壁有不同程度的損傷，接種適宜培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)繁殖，而革蘭氏陽(yáng)性菌無(wú)此現(xiàn)象^【6-7】。
其實(shí)，這兩種說(shuō)法都是認(rèn)為與革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)成分有關(guān)，所以此法可用于區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌。但至于粘稠的物質(zhì)是DNA還是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁類(lèi)脂物質(zhì)被氫氧化鉀皂化形成的，要闡明還有待進(jìn)一步的研究。
拉絲試驗(yàn)區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌的準(zhǔn)確性：相關(guān)研究報(bào)道表明^【6-8】，氫氧化鉀拉絲試驗(yàn)結(jié)果與革蘭氏染色一致，二者符合率為100%。拉絲試驗(yàn)不但能正確區(qū)別革蘭氏陰性菌和陽(yáng)性菌，還有助于復(fù)核革蘭氏染色結(jié)果的正確性，也是革蘭氏染色質(zhì)控的有力措施。
但拉絲試驗(yàn)結(jié)果也會(huì)受到試劑、菌量、菌型等因素影響^【6】，所以為了保證該試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確，操作時(shí)需注意：
1）氫氧化鉀溶液的濃度在20-50g/L較佳^【8】，濃度過(guò)低會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果；
2）挑取菌量多少也很重要，菌落直徑1.5-3mm，取1/2-1個(gè)菌落，如菌落直徑小于1mm，取2-3個(gè)菌落，菌量過(guò)少反應(yīng)遲緩甚至出現(xiàn)假陰性結(jié)果；
3）光滑（S）型與粗糙(R）型菌落進(jìn)行試驗(yàn)， R型革蘭氏陰性菌雖能出現(xiàn)拉絲現(xiàn)象但比S型革蘭氏陰性菌慢，且菌量過(guò)少時(shí)呈陰性反應(yīng)，因此，對(duì)于R型菌落的菌量宜相應(yīng)多取。
參考文獻(xiàn)：

1,Smith HL Jr. A Presumptive test for vibros: The “String" Test. Bull WHO,1970,42:817.
2,Shushan H.快速區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性與陰性厭氧菌的輔助方法。國(guó)外醫(yī)學(xué)：微生物學(xué)分冊(cè)，1982，1：47.
3,Agbonlahor DE, Odugbemi Phd To,Udofia PO. Differentiation of Gram-Positive and Gram-Negative Bacteria and Yeasts Using a Modification of the “String" Test. Amer J Med Techn,1983,49:177.
4,衛(wèi)生部《霍亂防治手冊(cè)》第六版(2013年)
5,張崑. 應(yīng)用氫氧化鉀法區(qū)分革蘭氏陰、陽(yáng)性細(xì)菌的探討. 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 1983年12卷4期:97.
6,解曉珍，田洪明，舒亦平，潘紹武.細(xì)菌拉絲試驗(yàn)的應(yīng)用探討. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),1995年第17卷第1期：67-68.
7,張素萍，路高社. 拉絲試驗(yàn)的應(yīng)用及其影響因素的觀察. 北京軍qu醫(yī)藥 1995年第7卷第4期:312-313.
8,王秀芹.氫氧化鉀拉絲試驗(yàn)與革蘭氏染色的應(yīng)用比較. 齊魯醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2004年第15卷第3期：54.

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